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植物组织透射电镜取材实验注意事项

1、植物组织取材原则:

  植物组织取材较为简单,取材前,先查阅文献,明确实验目的,设计好实验流程,熟悉组织结构及分布,对需要观察的结构需要有组织学位置判断。另外,戊二醛会影响抗原活性,如果课题需要做免疫性的实验,取材时需要用不同的固定液固定。固定液一般为2.5%电镜专用戊二醛。


2、取材器材与试剂:

  冰盒、手术刀、手术剪、EP管、2.5%戊二醛、蜡盘(光盘、载玻片均可)、封口膜、吸管、注射器。均4度预冷备用。


3、取材流程

  3.1取材基本要点:

  小没有方向的组织取材尺寸为1mm×1mm×1mm,有方向的组织为1mm×1mm×3mm为宜,3mm为长轴的方向。因为固定液的穿透能力只有0.5mm,若样品过大会使内部固定不良样品过小时观察的目标将受到局限。

  利:取材刀片要锋利,一般用剃须刀片,操作应始终贯彻动作轻柔。只做直线切割,避免对组织的挤压及拉锯,以免引起人工损伤。

  净:野外取材时,要保证材料洁净,PBS或者蒸馏水将材料冲洗感觉。一定要注意土壤、砂石的污染。会导致切片机钻石刀的损坏。

  准:电镜视野非常窄,所以取材的部位一定要准确可靠,根据研究目的要考虑到定位和定向的问题。

  冷4℃操作保存送样。尽量在低温下操作,降低水解酶的活性,所用容器和器械应预冷,取好的标本放在4冰箱保存。

  3.2、植物组织取材具体操作:

  植物实验设计时,需要注意,太硬及太老的组织因为不进行超薄切片而无法进行电镜视野,在实验设计中尽量规避。尽量选择幼嫩的叶片、根尖、果实等部位进行实验。取材时,先用蒸馏水或缓冲液将待测组织冲洗干净,然后快速将需要实验的组织块切下或剪下,转移到滴有戊二醛的蜡板上。然后将样品切成1立方毫米小块每组3-5块。对于有方向性的组织,可以根据组织类型切成截面1平方毫米,长2-3毫米的长条,方便组织定位。最后用牙签将组织块逐一放入盛满固定液的EP管中。如果组织块漂浮在固定液表面,真空泵抽气直至样品沉入页面以下。如果还是会漂起来,可以用纱布将组织块压到液面以下。最后将样品管放入4冰箱或冰盒,固定2~4h后邮寄。邮寄时固定液充满EP管,封口膜封口,气泡膜或报纸包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式运输,冰袋2-3个(-20℃冰袋,多了会冻坏样品),一定要与样品隔开。