植物组织透射电镜取材实验注意事项

1、植物组织取材原则：

  植物组织取材较为简单，取材前，先查阅文献，明确实验目的，设计好实验流程，熟悉组织结构及分布，对需要观察的结构需要有组织学位置判断。另外，戊二醛会影响抗原活性，如果课题需要做免疫性的实验，取材时需要用不同的固定液固定。固定液一般为2.5%电镜专用戊二醛。

2、取材器材与试剂：

  冰盒、手术刀、手术剪、EP管、2.5%戊二醛、蜡盘（光盘、载玻片均可）、封口膜、吸管、注射器。均4度预冷备用。

3、取材流程：

  3.1、取材基本要点：

  小：没有方向的组织取材尺寸为1mm×1mm×1mm，有方向的组织为1mm×1mm×3mm为宜，3mm为长轴的方向。因为固定液的穿透能力只有0.5mm，若样品过大会使内部固定不良；样品过小时观察的目标将受到局限。

  利：取材刀片要锋利，一般用剃须刀片，操作应始终贯彻动作轻柔。只做直线切割，避免对组织的挤压及拉锯，以免引起人工损伤。

  净：野外取材时，要保证材料洁净，PBS或者蒸馏水将材料冲洗感觉。一定要注意土壤、砂石的污染。会导致切片机钻石刀的损坏。

  准：电镜视野非常窄，所以取材的部位一定要准确可靠，根据研究目的要考虑到定位和定向的问题。

  冷：4℃操作、保存、送样。尽量在低温下操作，降低水解酶的活性，所用容器和器械应预冷，取好的标本放在4℃冰箱保存。

  3.2、植物组织取材具体操作：

  植物实验设计时，需要注意，太硬及太老的组织因为不进行超薄切片而无法进行电镜视野，在实验设计中尽量规避。尽量选择幼嫩的叶片、根尖、果实等部位进行实验。取材时，先用蒸馏水或缓冲液将待测组织冲洗干净，然后快速将需要实验的组织块切下或剪下，转移到滴有戊二醛的蜡板上。然后将样品切成1立方毫米小块每组3-5块。对于有方向性的组织，可以根据组织类型切成截面1平方毫米，长2-3毫米的长条，方便组织定位。最后用牙签将组织块逐一放入盛满固定液的EP管中。如果组织块漂浮在固定液表面，真空泵抽气直至样品沉入页面以下。如果还是会漂起来，可以用纱布将组织块压到液面以下。最后将样品管放入4℃冰箱或冰盒，固定2～4h后邮寄。邮寄时固定液充满EP管，封口膜封口，气泡膜或报纸包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式运输，冰袋2-3个（-20℃冰袋，多了会冻坏样品），一定要与样品隔开。