细菌透射电镜取材实验注意事项

1、细菌取材原则：

  细菌样品结构简单，一般分为液体培养及固定培养，观察又分为常规透射电镜或负染观察。取材时要区分对待。取材前，先查阅文献，明确实验目的，设计好实验流程，熟悉超微结构及分布，对需要观察的结构及特点需要有自己的判断。另外，戊二醛会影响抗原活性，如果课题需要做免疫性的实验，取材时需要用不同的固定液固定。固定对取材用器材及试剂，进行清洁及预冷，写好取材的标签。取材时，务必做到相同条件下取材，相同人员平行操作。固定液一般为2.5%电镜专用戊二醛。

2、细菌取材操作方法：

  2.1、对于观察细菌鞭毛、菌毛、纳米材料附着于细菌的样品:采用液体培养基培养。因为鞭毛容易脱落，在操作时尽量轻柔。对于能自然沉淀的细菌，可直接取细菌沉淀，PBS清洗2次，清洗时也让细菌自然沉淀不要离心，操作会残留部分培养基，但影响较小。如果细菌不能自然沉淀，只能低速离心，取沉淀固定。但是对于鞭毛易脱落的细菌，会有较大影响，我们会优先选择新鲜菌液进行实验。然后用2.5%戊二醛固定，4℃保存运输。送样时，同时提供新鲜菌液及戊二醛固定的菌液。

  2.2、对于观察细菌内部结构的样品：

  2.2.1、如果是液体培养基培养的细菌，可直接离心，弃上清，沉淀用PBS洗2次，加2.5%戊二醛固定。如果需要观察到材料在细菌上的附着，操作尽量轻柔，能自然沉淀就不要离心。且清洗的时候要小心。防止材料脱落。

  2.2.2、如果是固定培养的细菌，可用牙签挑取所需观察的菌落，直接置于2.5%戊二醛固定液中，4℃保存及运输。挑取的时候，尽量避免挑取培养基。