|
脂肪组织透射电镜取材实验注意事项1、脂肪组织取材原则: 脂肪组织是电镜实验中比较难处理的一类样品,取材前,先查阅文献,明确实验目的,设计好实验流程,熟悉组织结构及分布,对需要观察的结构需要有组织学位置判断。另外,戊二醛会影响抗原活性,如果课题需要做免疫性的实验,取材时需要用不同的固定液固定。脂肪组织不灌注,直接取材。对取材用器材及试剂,进行清洁及预冷,写好取材的标签。取材时,务必做到相同条件下取材,相同人员平行操作。固定液一般为2.5%电镜专用戊二醛,灌流固定选用3%多聚甲醛1%戊二醛。 2、取材器材与试剂: 冰盒、手术刀、手术剪、剃须刀片、EP管、2.5%戊二醛、蜡盘(光盘、载玻片均可)、封口膜、吸管、注射器。均4度预冷备用。 3、取材流程(不灌注取材): 3.1、取材基本要点: 小:没有方向的组织取材尺寸为1mm×1mm×1mm,有方向的组织为1mm×1mm×3mm为宜,3mm为长轴的方向。因为固定液的穿透能力只有0.5mm,若样品过大会使内部固定不良;样品过小时观察的目标将受到局限。 轻:取材刀片要锋利,一般用剃须刀片,操作应始终贯彻动作轻柔。只做直线切割,避免对组织的挤压及拉锯,以免引起人工损伤。 准:电镜视野非常窄,所以取材的部位一定要准确可靠,根据研究目的要考虑到定位和定向的问题。 冷:4℃操作、保存、送样。尽量在低温下操作,降低水解酶的活性,所用容器和器械应预冷,取好的标本放在4℃冰箱保存。 3.2、脂肪组织取材具体操作: 实验动物麻醉、灌流充分,然后用粗的剪刀将动物断头,左手捏住大鼠两耳,右手持剪刀剪开胸腔,取出需要观察的脂肪组织,用锋利的刀片切下一块脂肪组织置于滴有预冷固定液的蜡板上,切成1立方毫米小块每组3-5块(褐脂质地同肌肉类似,不需要特殊处理。白脂因为含有大量脂滴,会漂浮在固定液表面,且容易吸附在管壁上,较难处理)。最后用牙签将组织块逐一放入盛满固定液的EP管中。用纱布将组织块压到液面以下。最后将样品管放入4℃冰箱,固定2~4h后邮寄。邮寄时固定液充满EP管,封口膜封口,气泡膜或报纸包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式运输,冰袋2-3个(-20℃冰袋,多了会冻坏样品),一定要与样品隔开。 |