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神经组织透射电镜取材注意事项

1、神经取材原则:

  神经组织结构较为复杂,取材前,先查阅文献,明确实验目的,设计好实验流程,熟悉组织结构及分布,对需要观察的结构需要有组织学位置判断。另外,戊二醛会影响抗原活性,如果课题需要做免疫性的实验,取材时需要用不同的固定液固定。神经组织可以不灌注取材,如果灌注,请一定保证灌注充分,灌注充分效果会远低于不灌注。对于未进行灌流固定的动物最好先进行电镜标本的取材,以免组织自溶,影响超微结构的观察。对取材用器材及试剂,进行清洁及预冷,写好取材的标签。取材时,务必做到相同条件下取材,相同人员平行操作。固定液一般为2.5%电镜专用戊二醛,灌流固定选用3%多聚甲醛1%戊二醛。


2、取材器材与试剂:

  冰盒、手术刀、手术剪剃须刀片、EP管、2.5%戊二醛、蜡盘(光盘、载玻片均可)、封口膜、吸管、注射器。均4度预冷备用。


3、取材流程(不灌注取材)

  3.1取材基本要点:

  小:没有方向的组织取材尺寸为1mm×1mm×1mm,有方向的组织为1mm×1mm×3mm为宜,3mm为长轴的方向。因为固定液的穿透能力只有0.5mm,若样品过大会使内部固定不良样品过小时观察的目标将受到局限。

  轻:取材刀片要锋利,一般用剃须刀片,操作应始终贯彻动作轻柔。只做直线切割,避免对组织的挤压及拉锯,以免引起人工损伤。

  准:电镜视野非常窄,所以取材的部位一定要准确可靠,根据研究目的要考虑到定位和定向的问题。

  冷:4操作保存送样。尽量在低温下操作,降低水解酶的活性,所用容器和器械应预冷,取好的标本放在4冰箱保存。

  3.2、神经组织取材具体操作:

  实验动物急性处死或麻醉,用粗的剪刀将动物断头,左手捏住大鼠两耳,右手持剪刀从鼠背侧颈部将头皮沿正中线剪开,然后用持针器沿鼠颈部着手向上剥除颅骨,取出脑组织,用镊子捏住延髓将脑组织放于预冷的蜡板上,用锋利的刀片沿大脑纵裂矢状切为两半,用注射器将预冷的2.5%戊二醛固定液冲入侧脑室预固定,去除侧脑室上外侧壁的脑组织,将海马从剩余脑组织上剥离下来,置于滴有预冷固定液的蜡板上,切成1立方毫米小块每组3-5块。最 后用牙签将组织块逐一放入固定液的EP管中。放入4冰箱,固定2~4h后邮寄。邮寄时固定液充满EP管,封口膜封口,气泡膜或报纸包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式运输,冰袋2-3个(-20℃冰袋,多了会冻坏样品),一定要与样品隔开。