外泌体电镜

　　外泌体（exosomes）主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，直径大约为30~150 nm。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。

　　实验流程：

　　1.醛类固定：加入1mL 2.5%戊二醛溶液（PBS稀释），4度固定过夜；

　　2．清洗：用1mL PBS清洗4次，每次须静置15min；

　　3．锇酸固定：用2%锇酸溶液4度固定2h；

　　4．清洗：用PBS清洗4次，每次须静置15 min；

　　5．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各静置15min(在70%乙醇中静置过夜)，再用100%乙醇脱水2次，每次静置20min；

　　6．置换：用**置换2次，每次静置15min；

　　7.浸渍：过程如下：

　　A．**：包埋剂=2：1（体积比）的浸渍液中浸渍1h

　　B．**：包埋剂=1：1（体积比）的浸渍液中浸渍1h

　　C．**：包埋剂=1：2（体积比）的浸渍液中浸渍4h；

　　D．纯包埋剂浸渍2次,每次24h；

　　8．包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；

　　9．聚合：将包埋板置于65℃条件下聚合48h以上；

　　10．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm；

　　11．超薄切片：切片厚度70nm左右；

　　12．染色：醋酸双氧铀染色10min后清洗；醋酸铅染色10min清洗；

　　13.上机检测。