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外泌体电镜

时间:2021-05-17        阅读

  外泌体(exosomes)主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中,直径大约为30~150 nm。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。


  实验流程:


  1.醛类固定:加入1mL 2.5%戊二醛溶液(PBS稀释),4度固定过夜;


  2.清洗:用1mL PBS清洗4次,每次须静置15min;


  3.锇酸固定:用2%锇酸溶液4度固定2h;


  4.清洗:用PBS清洗4次,每次须静置15 min;


  5.脱水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各静置15min(在70%乙醇中静置过夜),再用100%乙醇脱水2次,每次静置20min;


  6.置换:用**置换2次,每次静置15min;

外泌体电镜

  7.浸渍:过程如下:


  A.**:包埋剂=2:1(体积比)的浸渍液中浸渍1h


  B.**:包埋剂=1:1(体积比)的浸渍液中浸渍1h


  C.**:包埋剂=1:2(体积比)的浸渍液中浸渍4h;


  D.纯包埋剂浸渍2次,每次24h;


  8.包埋:将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中;


  9.聚合:将包埋板置于65℃条件下聚合48h以上;


  10.修块:将包埋头修成梯形,且样品表面积小于0.2mm×0.2mm;


  11.超薄切片:切片厚度70nm左右;


  12.染色:醋酸双氧铀染色10min后清洗;醋酸铅染色10min清洗;


  13.上机检测。