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实验室中常见的外泌体提取方法介绍

时间:2021-10-11     作者:www.biomisp.com

  外泌体是活细胞分泌的直径为40-150nm的双脂膜结构的小泡。外泌体广泛存在于各种体液中,如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等。分泌物传递外的一种功能性分子,包括蛋白质、脂类和核酸受体等细胞,参与细胞间的通讯,影响细胞的各种生理和病理功能,因此引起了许多研究者的关注,进一步研究体外分泌器能否获得高纯度是至关重要的,下面为大家介绍实验室常用的外泌体提取方法。


  目前实验室分离外泌体常用的方法有:超离心法、聚合物沉淀法、分子排斥法、超滤法等,下面依次介绍。


  超速离心分离:超离心法是目前最常用的分离分泌物体的方法之一,该方法广泛应用于各种生物样品,如血清、血浆、尿液、唾液、细胞培养和脑脊液的分析,也是目前分离方法中的“金标准”,据估计,采用超离心法分离体外泌体的研究人员占全部方法的56%。


  优点:该方法不需要标记外泌体或使用其他分离试剂,不易被污染。该方法适用于大剂量样品分离,外泌体纯度高。


  缺点:耗时和劳动密集型,高度依赖手工劳动,回收率低,由于超高速离心,外泌体容易破坏结构和功能,并容易聚集成块,不利于下游分析。(虽然它是黄金标准,但也有许多缺点)


  聚合物沉淀方法:聚合物沉淀的原理是聚合物被水分子“劫持”,导致分泌体外的溶解度降低,因此在低速离心沉淀的条件下,画面非常清晰,不仅仅是分泌体外的水分子在体表,一些杂蛋白在水分子表面,所以加入聚合物后,机体外与杂蛋白分泌聚集在一起并离心沉淀下来,因此,沉淀法获得的外泌体纯度是一个硬伤口。许多公司已经开发了一系列用于不同样本来源(血清、血浆、细胞培养、尿液等)的外泌体提取试剂盒,可用于提取外泌体核酸,但不能用于外泌体蛋白质谱分析。

聚合物沉淀方法

  优点:无需大型昂贵设备,大剂量样品加工,使用方便,操作简单,成本低。


  缺点:纯度和回收率低,蛋白质杂性多,粒径不均匀,聚合物难以去除,影响下游分析。


  分子排阻的方法:在分子排斥法中,大分子不能进入凝胶孔,并迅速被流动相沿着多孔凝胶之间的空隙避开,而小分子可以进入凝胶孔,并被保留和洗脱较慢。液分离粒度液之间的差异和其他蛋白质,即液与大粒径将筛选了第一,而蛋白质与小粒径将筛选了之后,将分离液和高纯液和蛋白质之间的颗粒大小的差异。实验室的朋友们可以选择填充剂并建立自己的色谱柱,如果这种方法太贵,外泌体分离试剂盒也可用。


  优点:外泌体纯度高,结构不受破坏。


  缺点:它可以与其他类似大小的颗粒混合,如乳糜微粒、低密度脂蛋白微粒等。


  超滤方法:超滤法是将溶剂和小分子物质过滤到膜的另一侧,将相对较大的分子物质拦截在超滤膜中,以达到分离的目的。外泌体的直径为40~150nm,比一般蛋白大。我们可以用孔径小于150nm的超滤膜通过低速和长期离心分离样品中的外泌体。

超滤法

  优点:该工艺操作方便、速度快、成本低、使用方便、富集效率高。


  缺点:膜容易丢失和变形,堵塞的可能性大,大颗粒蛋白质污染严重,容易粘膜而丢失。