【冷冻电镜】干货小知识

　　冷冻电子显微术被称为冷冻电子显微术。低温扫描电镜(Cryo-SEM)是一种用于扫描电镜的超低温冷冻制样和透射技术，可直接观察液体、半液体和电子束敏感样品，如生物和分子材料。样品经过超低温冷冻、破碎、镀膜、制样(喷金/喷碳)处理后，通过冷冻传输系统在电镜中的冷台(温度可达-185)进行观察。冷冻电镜中的冷冻技术可以瞬间冷冻样品，并在冷冻状态下保存和转移，从而最大限度地保持样品原有的性质，获得的数据更加准确，实验成功率更高。

　　低温电子显微镜的分类

　　目前我们讨论的冷冻电镜基本上是指冷冻透射电镜，但如果从冷冻技术的角度来定义冷冻电镜，冷冻电镜主要可以分为冷冻透射电镜、冷冻扫描电镜和冷冻蚀刻电镜。

　　冷冻透射电子显微镜

　　Cryo-TEM  (Cryo-TEM)通常在普通TEM上增加一个样品冷冻台，将样品冷却到液氮温度(77K)。观察对温度敏感的样品，如蛋白质和生物切片。通过冷冻样品，可以减少电子束对样品的损伤，减少样品的变形，从而获得真实的样品形貌。

　　一台冷冻透射电镜的价格在600万美元左右，极其昂贵。其优势主要体现在以下几个方面：一是加速电压高，电子穿透厚样品；二是光学性能好的镜头多；第三，样表稳定；第四是全自动，液氮自动更换，样品自动更换，清洁度自动保持。

　　2.2冷冻扫描电子显微镜

　　SEM工作者面临一个不可回避的事实，所有生命科学和许多材料科学的样品都含有液体成分。许多动植物组织的含水量达到98%，这是扫描电镜工作者最难解决的样品问题。

　　低温扫描电镜技术是克服样品含水量问题的一种快速、可靠、有效的方法。这种技术也广泛用于观察一些“困难”的样品，如那些对电子束敏感且具有不稳定性的样品。各种高压模式的出现，如VP、LV和ESEM，使得扫描电子显微镜能够观察未冷冻和干燥的样品。然而，冷冻扫描电子显微镜仍然是防止样品失去水分的最有效的方法。它可以应用于任何真空状态，包括安装在SEM中的Peltier载物台和将水蒸气冲入样品室的装置。SEM还具有一些其他优点，例如冻结断裂的能力和通过控制样品的升华蚀刻选择性去除表面水分(冰)的能力。