植物石蜡切片黄酮染色实验步骤

黄酮广泛存在自然界中的部分植物和浆果中，黄酮类化合物具有抗氧化、 抗菌、抗病毒、抗炎、促进生长以及调节免疫力等多种 生物学功能。通过植物石蜡切片，原位染色后荧光显微镜下可以直观地看到黄酮分布特点，欢迎咨询。

1、脱水浸蜡：将样品整理好放入脱水盒中。将脱水盒放进脱水机内依次梯度酒精脱水。75%酒精4h，85%酒精2h，90%酒精2h，95%酒精2h，无水乙醇I 1h，无水乙醇II 1h，醇苯混合液5-10min，二甲苯I 5-10min，二甲苯II 5-10min，62℃蜡苯混合液2h，62℃融化石蜡I 4h，62℃融化石蜡II 4h。

2、石蜡包埋：将浸好蜡的组织转移到包埋机上进行包埋。先将少量融化石蜡加入包埋框，待蜡凝固之前将样品从脱水盒内取出放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却，待蜡完全凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

3、石蜡切片：将修整好的蜡块夹到石蜡切片机切片上，根据实验目的不同，切片厚度5-10μm进行切片。蜡带漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织摊平，然后用防脱载玻片将组织捞起，于60℃烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

4、黄酮染色液配置方法：PBS缓冲液配置10%蔗糖、2%DMSO混合液，然后称取0.5g二苯基硼酸-2-氨基乙酯，溶于100ml混合液中，即为0.5%二苯基硼酸-2-氨基乙酯染色液。

5、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min，二甲苯Ⅱ15min，无水乙醇Ⅰ5min，无水乙醇Ⅱ5min，85%酒精5min，75%酒精5min，蒸馏水洗。

6、黄酮染色：样品切片PBS冲洗2次，每次1min，然后滴加黄酮染色液至切片上，室温避光染色，10min，完成后PBS冲洗2次，每次1min，抗荧光淬灭封片剂封片，避光保存。    

7、数据采集：切片于显微镜玻片扫描仪霞，使用激发波长488进行拍照。

8、实验结果：见百度网盘链接。

附：结果判读——黄色荧光为黄酮表达信号。