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植物石蜡切片黄酮染色实验步骤

黄酮广泛存在自然界中的部分植物和浆果中,黄酮类化合物具有抗氧化、 抗菌、抗病毒、抗炎、促进生长以及调节免疫力等多种 生物学功能。通过植物石蜡切片,原位染色后荧光显微镜下可以直观地看到黄酮分布特点,欢迎咨询。

 

1、脱水浸蜡:将样品整理好放入脱水盒中。将脱水盒放进脱水机内依次梯度酒精脱水。75%酒精4h85%酒精2h90%酒精2h95%酒精2h,无水乙醇I 1h,无水乙醇II 1h,醇苯混合液5-10min,二甲苯I 5-10min,二甲苯II 5-10min62℃蜡苯混合液2h62℃融化石蜡I 4h62℃融化石蜡II 4h

2、石蜡包埋:将浸好蜡的组织转移到包埋机上进行包埋。先将少量融化石蜡加入包埋框,待蜡凝固之前将样品从脱水盒内取出放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,待蜡完全凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

3、石蜡切片:将修整好的蜡块夹到石蜡切片机切片上,根据实验目的不同,切片厚度5-10μm进行切片。蜡带漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织摊平,然后用防脱载玻片将组织捞起,于60℃烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

4、黄酮染色液配置方法:PBS缓冲液配置10%蔗糖、2%DMSO混合液,然后称取0.5g二苯基硼酸-2-氨基乙酯,溶于100ml混合液中,即为0.5%二苯基硼酸-2-氨基乙酯染色液。

5、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯15min,二甲苯Ⅱ15min,无水乙醇Ⅰ5min,无水乙醇Ⅱ5min85%酒精5min75%酒精5min,蒸馏水洗。

6、黄酮染色:样品切片PBS冲洗2次,每次1min,然后滴加黄酮染色液至切片上,室温避光染色,10min,完成后PBS冲洗2次,每次1min,抗荧光淬灭封片剂封片,避光保存。    

7、数据采集:切片于显微镜玻片扫描仪霞,使用激发波长488进行拍照。

8、实验结果:见百度网盘链接。

 

附:结果判读——黄色荧光为黄酮表达信号。


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