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植物切片卢戈氏染色实验步骤

1、脱水浸蜡:将样品整理好放入脱水盒中。将脱水盒放进脱水机内依次梯度酒精脱水。75%酒精4h85%酒精2h90%酒精2h95%酒精2h,无水乙醇I 1h,无水乙醇II 1h,醇苯混合液5-10min,二甲苯I 5-10min,二甲苯II 5-10min62℃蜡苯混合液2h62℃融化石蜡I 4h62℃融化石蜡II 4h

2、石蜡包埋:将浸好蜡的组织转移到包埋机上进行包埋。先将少量融化石蜡加入包埋框,待蜡凝固之前将样品从脱水盒内取出放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,待蜡完全凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

3、石蜡切片:将修整好的蜡块夹到石蜡切片机切片上,切片厚度8-10μm进行切片。蜡带漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织摊平,然后用防脱载玻片将组织捞起,于60℃烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。

4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯15min,二甲苯Ⅱ15min,无水乙醇Ⅰ5min,无水乙醇Ⅱ5min85%酒精5min75%酒精5min,蒸馏水洗。

5、卢戈氏染色:切片入卢戈氏染液浸泡染色,5min。自来水稍洗,洗去多余染液即可。然后依次进入50%乙醇,70%乙醇,80%乙醇,无水乙醇三缸脱水。

6、透明封片:切片入干净的二甲苯透明5min,中性树胶封片。

7、数据采集:切片于显微镜下采集相关数据。

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