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透射电镜取材注意事项生物样品透射电镜取材注意事项 取材是电镜实验的第一步，其操作成功与否直接关系到电镜结果的效果 及成败。为了得到好的结果，请务必按要求做好取材！取材基本要点：快 （1min）、冷（4 ℃）、小（1 mm3）、净（无杂质）、准（部位准确）。不 同的样品，取材细节上有很大区别，有任何疑问，请扫描右方二维码，即可 获得专业一对一电镜实验及解图指导！ 一、动物组织取材流程及要求 取材流程：动物麻醉或断头急性处死，解剖取出所需的器官或组 织，生理盐水简单冲洗血液及组织液。按要求将组织切成1mm3左 右小块，固定于组织及细胞电镜专用2.5%戊二醛固定液。 取材要求： 1、位置：肝、肺、脾等无需定位组织取1mm3组织，3-5块；需要定位组织如骨骼肌、肾、肠、血管、胰岛等组织取材大小为0.5mm× 1mm×3mm左右的长条状，且保证观察结构在组织块中。 2、操作：试剂、容器、器械提前4℃预冷；组织离体后，1min内浸 入戊二醛固定液。取材时，可提前准备一个载玻片（硬卡纸），滴 几滴戊二醛固定液，把标本浸在液滴中修整至合适大小（时间可稍 长），用牙签挑出 3～5 粒标本，放入1.5ml尖头EP管。将修整好的 标本块放入戊二醛固定液后，普通 4℃冰箱保存。
二、细胞取材流程及要求 取材流程：细胞直接刮下（不可胰酶消化，会造成细胞损伤），细胞 悬液离心，弃上清，PBS 洗2次（敏感的细胞直接固定，不洗），低速 （1000-3000rpm）离心成团，加入组织及细胞电镜专用2.5%戊二醛固定 液 4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为细胞悬浮液操作。固体 培养基培养的菌可直接将菌落挑到PBS中，后续操作一致。 取材要求： 1、细胞数量充足（6cm 或10cm 皿长满），离心后在ep管中绿豆大小； 2、缓冲液、戊二醛固定液等PH值7.3-7.4，4℃提前预冷； 3、贴壁细胞连着培养基用细胞刮斜着快速刮下，不要反复来回刮； 4、细胞悬液转入离心管，1000-3000rpm离心成团，弃上清，加PBS，将细胞转入1.5ml尖头 ep管，再次离心后弃上清。再加PBS重复上述步骤，最后加2.5%戊二醛固定，4℃保存。操作 轻柔，尽量保证细胞不散开。(转速及时间请结合细胞情况，尽量低转速、短时间，以细胞 离心成团为准！（PBS 清洗时间过长，易造成细胞损伤)； 三、植物组织取材及要求 取材流程：PBS冲洗样品，确保无泥沙等污染物。然后用锋利刀片或剪刀将 样品切成合适大小，装入预冷的植物及细菌电镜专用2.5%戊二醛中。不需要定位的样品切成1立方毫米大小（如叶片、果实、花粉等），需要定位的 样品，切成0.5mm×1mm×3mm的长条状（茎、根、表皮等）随后抽气，让组织能沉淀到管底。（简易抽气方法：将植物组织同固定液一起倒入注射器， 用乳胶手套食指堵住注射器出口，右手拉动针栓，将注射器口垂直向上， 松开食指，右手轻推针栓使液面上的气泡从注射器口排出，反复多 次，直 至组织沉入固定液。）
四、其他样品 悬浮细胞、细菌可视为细胞悬液操作。固体培养的细菌，可视为被切小的组织块，直接用牙 签挑取3-5个菌落即可。外泌体、纳米材料、脂质体、病毒颗粒等负染样品，根据样品特 点，固定或不固定后合适条件运输。具体可咨询工作人员。 五、样本储存运输标准： 储存：样本取材后，4℃保存时间不超过1个月。 运输：固定液充满EP管，封口膜封口，气泡膜或报纸包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋 的方式运输，冰袋2-3个（-20℃冰袋，不要太多），一定要与样品隔开。特殊样品 如脂肪、植物等，用纱布将样品压到液面以下，保证充分固定。（下图1）
六、邮寄地址： 电话号码：刘振 18317038349 业务邮箱：biofcen@163.com 地址：湖北省武汉市洪山区高新四路 40 号葛洲坝.太阳城 18 栋304-1(北 1) 部分例图展示：
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