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植物外泌体蔗糖垫纯化案例～实操数据分享天麻作为传统名贵中药材，其有效成分的提取与研究一直是中医药现代化的重要课题。近年来，随着外泌体研究热潮的兴起，科研人员发现天麻外泌体不仅保留了天麻的活性成分，还具备独特的靶向递送特性。 为了高纯度天麻外泌体颗粒，需要对其进行分离和表征。通过使用30%和40%的蔗糖垫连续离心，随后进行超速离心，从天麻中分离出外泌体。使用纳米粒度分析（NTA）和透射电子显微镜（TEM）评估外泌体的粒径分布和形态。 实验步骤 1.取新鲜的天麻样本并置于1×磷酸盐缓冲液（PBS）中，并使用壁机进行破壁处理。 2.依次以300g，3000g，10000g离心去除天麻汁中的杂质。
3.将40%和30%的蔗糖垫液缓慢加入超速离心聚碳酸酯瓶中，保持两层分离，缓慢地加入上清液。 4.超速离心后，分别收集30%和40%的蔗糖垫为纳米囊泡
实验结果 1.采用纳米追踪分析（NTA ）测量了其粒径分布和颗粒浓度（Particle Metrix；Zetaview-PMX120-Z） 粒径范围纯化后明显集中，有效去除小颗粒和聚集体：
纯化前VS纯化后 囊泡体积显著优化，更加均一和集中：
纯化前VS纯化后 布朗运动轨迹清晰，数据真实有效：
纯化前VS纯化后 纯化后囊泡颗粒浓度大于5E+10 particles /mL。提取效率高：
如图所示，通过蔗糖垫法收获的外泌体经NTA分析显示为均质囊泡，且粒径分布更为均一，大小均在150nm左右，而且收获效率均高于1E+10 particles /mL。 2.采用透射电子显微镜（TEM）测量了其颗粒形态及背景大小分布（Jeol；JEM1400，EMSIS ；coms相机；2000W）
纯化前VS纯化后
纯化前VS纯化后
纯化前VS纯化后 如图所示，通过蔗糖垫法收获的外泌体经TEM分析显示为大小均一，具有典型的外泌体结构，且背景干净，无杂质影响，囊泡分散均匀，无破裂聚集等情况。 讨论 本实验采取了一种从天麻中分离纯化外泌体的策略，使这些囊泡能够实现高纯度，高浓度的生产。我们通过蔗糖垫纯化分离技术，采用连续离心和超速离心相结合的方式，从天麻中纯化出外泌体。该技术的另一优势是可利用浓度梯度去除污染物，例如非特异性蛋白质。 尽管超速离心是外泌体分离的有效手段，但其中仍存在损伤囊泡并降低产量，杂质影响的可能，蔗糖垫纯化的方式优化了这些缺点，补充了更高纯度外泌体获取的方式。 上一篇大体积黄芪外泌体提取与冻干下一篇肺泡超微结构 |
